GB/T 4789.6—2003.

1范围

GB/T 4789.6规定了食品中致泻大肠埃希氏菌的检验方法。

GB/T 4789.6适用于食品和食物中毒样品中致泻大肠埃希氏菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T 4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

3设备和材料

3.1冰箱:0℃~4℃。

3.2恒温培养箱:36℃士1℃,42℃.

3.3恒温水浴锅:100℃,65℃~～68℃,5o℃。

3.4显微镜:10×～100×。

3.5离心机:3 00o r/ min。

3.6酶标仪。

3.7均质器或灭菌乳钵。

6操作步骤

6.1增菌

样品采集后应尽快检验。除了易腐食品在检验之前预冷藏外，一般不冷藏。以无菌操作取检样25 g(mL),加在225 mL营养肉汤中,以均质器打碎1 min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量,接种乳糖胆盐培养基,以测定大肠菌群MPN,其余的移入500 mL广口瓶内，于36℃±1℃培养6 h。挑取1环,接种于1管30 mL肠道菌增菌肉汤内,于42℃培养18 h。

6.2分离

将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板﹔污染严重的检样,可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板,于36℃±1℃培养18 h~24 h,观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落,同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。

6.3 生化试验

6.3.1自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养物分别接种蛋白陈水、半固体、pH?.2尿素琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36℃培养过夜。

6.3.2 TSI斜面产酸或不产酸﹐底层产酸﹐H,S阴性,KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌。TSI底层不产酸,或H,S,KCN,尿素有任一项为阳性的培养物,均非大肠埃希氏菌。必要时做氧化酶试验和革兰氏染色。