GB/T 33410-2016.

1范围

GB/T 33410规定了生化试剂中蛋白酶K活性检测方法。

GB/T 33410适用于分子生物学实验中使用的蛋白酶K活性的测定。

规范性引用文件

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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

蛋白酶K活性单位protease K activity unit

在55℃,pH 8.0时,1 min内水解酪蛋白产生1 ug L-酪氨酸为一个酶活性单位。注:活性单位为U/mg.U/g或U/mL。

4原理

蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,可催化含有较多的丝氨酸位点的α-酪蛋白水解。本方法中采用a酪蛋白为反应底物,经蛋白酶K催化水解为L-酪氨酸,在275 nm处测定吸光度值。再通过测量各个浓度的L-酪氨酸标准溶液在275 nm 处的吸光度值,并构建标准曲线得出线性回归方程，以外标法定量。计算蛋白酶K的酶活性。

5仪器设备及器具

5.1 恒温水浴锅:控温精度士0.2 ℃.

5.2 pH计:精确至0.01 pH.

5.3 紫外-可见分光光度计:吸光度值精确至0.001.

5.4 1 cm石英比色皿。

5.5电子天平:感量0.000 1 g.